Análisis de la regulación transcripcional de diversos factores de complemento de baja expresión en la línea Hep-G2

Abstract

Los factores terminales del complemento humano se sintetizan mayoritariamente en el hígado, sin embargo la línea derivada de hepatoma Hep-G2, que produce la mayoría de las proteinas del complemento, no expresa algunos componentes como c6, c7 y factor h. Este hecho ha dificultado enormemente el estudio de la regulación de estos genes. Con el objetivo de estudiar la regulación de estos genes nos hemos planteado el objetivo de aislar y caracterizar las regiones promotoras de los tres genes humanos: c6, c7 y factor h. Hemos aislado aproximadamente 1 kb correspondiente a la región promotora de c6, c7 y factor h, y determinado su inicio de transcripción en hígado humano. Los tres genes tienen un inicio de transcripción único en hígado, pero excepto c7, carecen de una caja tata canónica. Todos poseen numerosas secuencias consenso tanto para factores de transcripción ubicuos, como específicos de hígado. Para analizar la actividad funcional del promotor de c6 hemos construido un sistema "reporter" y analizado su expresión mediante ensayos de transfección transitoria. Mediante estos experimentos hemos caracterizado que la ausencia de expresion de c6 en la linea Hep-G2 se debe a la ausencia de transcripción de su promotor en esta línea. Mediante ensayos de retardo en gel caracterizamos que esto se debe a la ausencia del factor de transcripción hepático c/ebpa en la linea Hep-G2. Este factor se une a la secuencia c/ebp localizada en -67 del gen de c6 y es imprescindible para su expresión. La transfección de un vector de expresión de c/ebpa en la línea hep-g2 restaura la expresión tanto endógena como la transcripción de c6, c7 y factor h, sugiriendo que la ausencia de expresión de este factor en esta línea es la responsable de la ausencia de expresión de c6, c7 y factor h en esta línea. Por último hemos analizado los mecanismos que regulan la expresión de estos genes durante la respuesta de fase aguda. El ifn-y es el principal estim